武漢貝科新肽科技有限公司
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原位雜交（In situ hybridazation）
固定
收集斑馬魚的胚胎，在Holfretor水中培養(yǎng)，到達(dá)所需要的發(fā)育時(shí)期時(shí)，用蛋白酶去除卵膜，用4%多聚甲醛固定，在4℃保存，二十四小時(shí)后用50%2%多聚甲醛溶液洗，然后換成，在-20C 保存，待用(兩天和兩天以上的胚胎需要用處理，去除色素。或者使用苯锍脲稀溶液培養(yǎng)，可阻斷色素的形成)
FISH技術(shù)的基本步驟包括探針制備、樣品預(yù)處理、探針與樣品的雜交、信號(hào)檢測(cè)和圖像分析等。在探針制備過程中，使用熒光標(biāo)記物代替同位素標(biāo)記物來(lái)標(biāo)記探針。在樣品預(yù)處理過程中，細(xì)胞或組織的固定、裂解和去除非特異性蛋白質(zhì)等操作都是必要的，以提高探針與目標(biāo)序列的親和力和特異性。在探針與樣品的雜交過程中，探針與樣品中的目標(biāo)序列進(jìn)行互補(bǔ)性雜交，形成可檢測(cè)的熒光信號(hào)。在信號(hào)檢測(cè)和圖像分析過程中，使用高靈敏度熒光顯微鏡檢測(cè)熒光信號(hào)并獲取高分辨率的細(xì)胞圖像。
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